1.0所需設(shè)備

LAF
歧管支架組件
真空泵。
鉗
剪

2.0所需材料

樣品
無(wú)菌0.45µm膜過(guò)濾器
無(wú)菌FTM
無(wú)菌SCDM
無(wú)菌0.1％w / v蛋白ept水。
70％無(wú)菌IPA溶液。
燃?xì)馊紵?br /> 無(wú)菌過(guò)濾組件
無(wú)菌SCDA板
無(wú)菌拭子

需要3.0實(shí)用程序

真空泵

4.0程序：

4.1膜過(guò)濾法

4.1.1成品樣品：按照SOP收集要測(cè)試的無(wú)菌樣品。從整個(gè)樣本中，隨機(jī)選擇LVP和SVP zui終滅菌產(chǎn)品以及無(wú)菌灌裝產(chǎn)品每批次20件（根據(jù)藥典）。
4.1.2中間體樣品：從LVP瓶裝機(jī)中隨機(jī)收集16個(gè)預(yù)先滅菌的瓶樣品進(jìn)行無(wú)菌測(cè)試（更換新產(chǎn)品時(shí)，應(yīng)收集16個(gè)Ist批次瓶樣品），以使每個(gè)瓶均應(yīng)代表瓶子包裝機(jī)模具的每個(gè)型腔。
4.1.3用干凈的塑料箱將樣品轉(zhuǎn)移到質(zhì)量控制部門。
4.1.4用70％IPA溶液分別擦拭樣品并保存在標(biāo)有產(chǎn)品名稱，批號(hào)和批號(hào)的干凈SS托盤中，然后通過(guò)干凈的傳遞箱將樣品轉(zhuǎn)移到無(wú)菌室進(jìn)行滅菌。
4.1.5按照SOP準(zhǔn)備培養(yǎng)基試管（FTM和SCDM），以制備培養(yǎng)基，將100-100 ml量的試管分配并塞緊。按照SOP的規(guī)定，在121ºC和15 psi的壓力下將培養(yǎng)基滅菌 20分鐘，以進(jìn)行高壓滅菌。
4.1.6高壓滅菌后，在試管上貼上培養(yǎng)基名稱，培養(yǎng)基批號(hào)，并在適當(dāng)?shù)臏囟认骂A(yù)孵育試管，即將SCDM試管在20至25ºC的溫度下進(jìn)行孵育，而FT??GM試管在30至35ºC的溫度下進(jìn)行24-48小時(shí)，然后對(duì)其進(jìn)行處理。無(wú)菌操作。
4.1.7 按照SOP的規(guī)定，在121ºC溫度和15psi壓力下的不銹鋼容器中，高壓滅菌服，不銹鋼杯，插座單元，剪刀和鑷子放置30分鐘。
4.1.8滅菌后，冷卻內(nèi)容物，并在SS容器中無(wú)菌轉(zhuǎn)移到清潔的通行證盒中。
5.4.1.9將預(yù)孵育的無(wú)菌培養(yǎng)基試管，SCDA平板，無(wú)菌拭子，無(wú)菌歧管和0.1％w / v蛋白ept水通過(guò)通道箱轉(zhuǎn)移至無(wú)菌測(cè)試室。
4.1.10按照規(guī)定進(jìn)入無(wú)菌室無(wú)菌室進(jìn)出程序的SOP。
4.1.11按照SOP啟動(dòng)LAF，以獲取LAF的操作說(shuō)明。
4.1.12用70％IPA溶液擦去所有待測(cè)無(wú)菌樣品。
4.1.13在開始無(wú)菌測(cè)試之前，根據(jù)SOP在整個(gè)測(cè)試過(guò)程中將SCDA板暴露在指定位置。
4.1.14用管道將過(guò)濾歧管支架組件與SS儲(chǔ)罐正確連接，并將已消毒的SS杯放在層流氣流單元下方的無(wú)菌容器中。檢查工作LAF的壓力計(jì)讀數(shù)，并檢查無(wú)菌室的溫度和濕度
4.1.15 LAF腔室工作壓力的壓力計(jì)讀數(shù)應(yīng)在WG的08 – 15mm之間。無(wú)菌室的溫度讀數(shù)應(yīng)為27ºC±2ºC。
4.1.16開啟真空泵，但借助單個(gè)歧管支架底座上的真空控制鍵關(guān)閉歧管支架組件的真空。現(xiàn)在借助消毒鉗在濾杯和容器之間放置0.45m無(wú)菌濾膜。
4.1.17通過(guò)向過(guò)濾器支架中加入約15 ml無(wú)菌液體A（0.1％蛋白ept水）來(lái)潤(rùn)濕濾膜，并通過(guò)真空過(guò)濾液體。
4.1.18用無(wú)菌SS刀片在燃?xì)馊紵髑扒虚_瓶/小瓶或安瓿的**，立即將不少于LVP的內(nèi)容物和SVP小瓶的全部?jī)?nèi)容物轉(zhuǎn)移到膜上。
4.1.19立即在真空下過(guò)濾溶液，并用100 ml無(wú)菌液體A清洗膜三遍（如果注射用無(wú)菌水，則無(wú)需使用液體A清洗）。
4.1.20完全過(guò)濾后，借助歧管真空控制鍵停止歧管的真空。
4.1.21在無(wú)菌鑷子的幫助下小心地提起膜，用無(wú)菌SS剪刀無(wú)菌地將微孔濾膜切成兩半，并通過(guò)僅在燃?xì)馊紵髑鞍蜗虏孱^，將一半轉(zhuǎn)移到FTM，另一半轉(zhuǎn)移到SCDM管。
4.1.22在兩個(gè)試管上貼上產(chǎn)品名稱B。編號(hào)，批號(hào)，測(cè)試日期，完成日期和測(cè)試依據(jù)。
4.1.23同時(shí)制備陰性對(duì)照，方法是過(guò)濾100 ml 0.1％蛋白％水而不是產(chǎn)品樣品，用無(wú)菌SS剪刀將膜切成兩半，將一半轉(zhuǎn)移到FTM，另一半轉(zhuǎn)移到SCDM，并將兩個(gè)管標(biāo)記為負(fù)面控制。
4.1.24在無(wú)菌過(guò)程中同時(shí)準(zhǔn)備一個(gè)腔室控制裝置，取兩支試管，一只為SCDM，另一支為FTM試管，拔出試管的棉塞，并在無(wú)菌過(guò)程中暴露在LAF中，無(wú)菌完成后重新插上試管，然后孵育管作為腔室控制。
4.1.25工作完成后，將所有接種的培養(yǎng)基通過(guò)培養(yǎng)箱轉(zhuǎn)移，然后將所有設(shè)備和裸露的平板轉(zhuǎn)移到微生物分析部分。
4.1.26立即按照無(wú)菌室進(jìn)出程序中指定的SOP離開程序從無(wú)菌區(qū)移走。
4.1.27將FTM管在30ºC–35ºC下孵育，將SCDM管在20ºC–25ºC下孵育14天。
根據(jù)IP，zui終滅菌產(chǎn)品的培養(yǎng)期不少于7天，無(wú)菌填充產(chǎn)品的培養(yǎng)期不少于14天。如果產(chǎn)品符合USP，BP規(guī)定，zui終滅菌產(chǎn)品和無(wú)菌填充產(chǎn)品的孵育期均為14天。
4.1.28按照SOP啟動(dòng)微生物分析室的LAF，并通過(guò)在FTM管中無(wú)菌接種10至100 cfu的金黃色葡萄球菌NCIM 2079，銅綠假單胞菌NCIM 2200，枯草芽孢桿菌NCIM 2063和環(huán)境菌群來(lái)準(zhǔn)備四個(gè)陽(yáng)性對(duì)照管EF-1.同樣地，通過(guò)分別用白色念珠菌NCIM 3471，黑曲霉NCIM 1196和環(huán)境菌群EF-2分別接種約10至100個(gè)細(xì)胞來(lái)制備三個(gè)SCDM陽(yáng)性對(duì)照。2.在30 –35ºC下孵育FTM陽(yáng)性對(duì)照管3天， SCDM陽(yáng)性對(duì)照管在20 –25ºC的溫度下放置5天。

4.2結(jié)果的觀察和解釋

4.2.1每天目視檢查培養(yǎng)基試管以得出其結(jié)論，以得到微生物生長(zhǎng)的宏觀證據(jù)。
4.2.2如果在任何試管中都沒(méi)有觀察到生長(zhǎng)的跡象，則要進(jìn)行測(cè)試的產(chǎn)品必須符合無(wú)菌測(cè)試。
4.2.3除非陰性對(duì)照在培養(yǎng)結(jié)束前顯示陰性，并且陽(yáng)性對(duì)照在指定的培養(yǎng)期內(nèi)顯示出生長(zhǎng)，否則測(cè)試無(wú)效。
4.2.4在確認(rèn)FTM和SCDM管均生長(zhǎng)后，銷毀所有陽(yáng)性對(duì)照（通常會(huì)在24至48小時(shí)內(nèi)觀察到生長(zhǎng)）。
4.2.5如果在任何試管中都發(fā)現(xiàn)了微生物生長(zhǎng)的跡象，則按照SOP進(jìn)行滅菌測(cè)試失敗調(diào)查，調(diào)查其失敗的原因。。如果調(diào)查報(bào)告認(rèn)為測(cè)試無(wú)效，則以20個(gè)單位重復(fù)測(cè)試。
4.2.6如果在重復(fù)試驗(yàn)中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)的跡象，則所檢驗(yàn)的產(chǎn)品符合無(wú)菌試驗(yàn)。如果在重復(fù)測(cè)試中發(fā)現(xiàn)微生物生長(zhǎng)的跡象，則所檢查的產(chǎn)品不符合無(wú)菌測(cè)試。
相關(guān)：倒置培養(yǎng)皿的培養(yǎng)

5.0注意事項(xiàng)

5.1樣品瓶/小瓶在移入無(wú)菌室之前以及在無(wú)菌操作之前，還應(yīng)先用已過(guò)濾的70％IPA擦拭干凈。艙口蓋也應(yīng)使用過(guò)濾的70％IPA溶液正確清潔。
5.2無(wú)菌操作中或無(wú)菌室內(nèi)所用的任何材料均應(yīng)進(jìn)行高壓滅菌。
5.3在用無(wú)菌加熱切割刀片切割之前，應(yīng)在燃?xì)馊紵髑懊孢m當(dāng)加熱樣品瓶/小瓶的**。
5.4無(wú)菌操作后應(yīng)立即清潔廢液容器，并用無(wú)菌擦拭器用過(guò)濾的70％IPA擦拭容器的外表面。

6.0頻率

對(duì)于LVP –明智的選擇
對(duì)于SVP –明智的選擇

7.0縮寫

SOP：標(biāo)準(zhǔn)操作程序
IPA：異丙醇
SVP：小劑量腸胃外
藥物L(fēng)VP：大劑量腸胃外
藥物FTM：巰基
乙酸液體培養(yǎng)基SCDM：大豆酪蛋白消化培養(yǎng)基